Le scénariste David Dalessandro, administrateur de l'Université de Pittsburgh et novice à Hollywood, a conçu le concept en 1992 après un article sur les serpents bruns de Birmanie grimpant aux arbres qui s'étaient retrouvés sur des avions pendant la Seconde Guerre mondiale. La première version du scénario s'appelait « Venom » et concernait seulement une espèce de serpent.

Inspiré par le film « Alien », Dalessandro a réécrit le scénario en ajoutant de nombreux serpents venimeux différents envahissant tout l'avion. La troisième version du scénario « Venom » a été rejetée par plus de 30 studios hollywoodiens en 1995 avant que New Line Cinema n'achète les droits en 1999.

Le film devait initialement être réalisé par le réalisateur hongkongais Ronnie Yu, et Samuel L. Jackson a accepté le rôle sans même lire le scénario — uniquement en raison du réalisateur, du scénario et du titre du film.

Quand le studio a tenté de changer le titre en « Pacific Air Flight 121 », Jackson a posé un ultimatum : soit on revient au titre original « Snakes on a Plane », soit il quitte le projet. Le titre a été restauré à son insistance le 2 mars 2006.

Profitant du gigantesque buzz sur Internet, New Line Cinema a commandé cinq jours supplémentaires de tournage en mars 2006 (le tournage principal s'était achevé en septembre 2005) pour changer la classification du film de PG-13 à R et satisfaire les attentes des fans.

C'est précisément durant ces jours de tournage supplémentaires que la fameuse réplique de Jackson « J'en ai assez de ces foutus serpents dans ce foutu avion ! » a été ajoutée, devenant un mème parodié sur Internet.

Le film utilisait plus de 450 serpents de 30 espèces différentes, dont un python de Birmanie de 5,8 mètres nommé Kitty, que l'équipe de tournage appelait Kong entre eux. Environ deux tiers des serpents à l'écran étaient animatroniques ou entièrement générés par ordinateur.

Selon les conditions du contrat de Samuel L. Jackson, les serpents vivants ne devaient pas se trouver à moins de 8 mètres de l'acteur, donc durant le tournage, il n'a eu aucun contact avec de vrais serpents.

Après la sortie du film en salles, des rumeurs se sont propagées selon lesquelles le 22 août 2006, dans un cinéma de Phoenix (Arizona), deux vipères à sonnettes du Texas vivantes avaient été volontairement relâchées lors d'une séance ; il s'est avéré plus tard qu'un serpent s'était glissé seul dans le hall d'entrée et l'autre avait été trouvé sur le parking — tous deux ont été capturés et relâchés dans le désert.

Le film a été parodié dans la comédie « Epic Movie », et un épisode de la série animée « Le Monde Incroyable de Gumball » contient un disque de référence intitulé « Crocodiles on a Train ».

Malgré le gigantesque buzz sur Internet, les revenus du film se sont avérés décevants : il a récolté seulement 15,25 millions de dollars le premier week-end pour des prévisions de 20 à 30 millions, et 62 millions de dollars au total à l'échelle mondiale. Cet échec a donné naissance au terme « effet Snakes on a Plane », décrivant des situations où le hype Internet ne se traduit pas par des revenus en salles.